产品货号：
WH0057
中文名称：
DNA/RNA共提取试剂盒
英文名称：
DNA/RNA Isolation Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒可从培养的动物细胞或者组织中快速同步提取DNA和总RNA，可同时处理大量不同样品。40～50min内即可完成反应，提取的DNA和总RNA纯度较高，可用于PCR和RT-PCR等多种分子生物学下游实验。
- 方便：从同一样本中同时得到DNA和RNA。
- 快速：40～50min即可完成一次抽提。
- 安全：提取过程无需酚氯仿有机物。
| 组分 | 规格 |
| 裂解液RLplus | 30mL |
| 去蛋白液RW1 | 40mL |
| 漂洗液RW | 12mL |
| RNase-Free ddH2O | 15mL |
| 缓冲液GD | 13mL |
| 漂洗液PW | 15mL |
| 洗脱缓冲液TB | 15mL |
| RNase-Free吸附柱CR3(含2mL收集管) | 50套 |
| 吸附柱CB3 | 50个 |
| RNase-Free离心管(1.5mL) | 100个 |
| RNase-Free离心管(2mL) | 50个 |
| RNase-Free收集管(2mL) | 50个 |
储存条件：室温(15～25℃)保存一年。加入β-巯基乙醇的裂解液RLplus 4℃可放置一个月。
DNaseI (目录号：WH0051)
β-巯基乙醇、无水乙醇
- 操作前在RLplus中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1mL RLplus中加入10μL β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLplus 4℃可放置一个月，裂解液RLplus在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热至56℃溶解并平衡至室温后使用。
- 第一次使用前应在漂洗液RW、PW和缓冲液GD中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
- 以下操作如非指明，均在室温下进行。
- 对于某些敏感的RNA应用实验可能需要完全去除DNA，可以参照DNase I消化流程在柱上进行。
- 操作步骤中离心转速12000rpm，即~13400×g
一、从培养细胞中同时提取DNA和总RNA
- 收集细胞：
悬浮细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107）：估计细胞数量，300×g离心5min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。
单层贴壁细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107）：可直接在培养容器中裂解(容器直径不超过10cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。(在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法。）- 直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸除细胞培养基上清，立即进行第2步裂解步骤。
- 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含有0.10～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，造成RNA的产量降低。
- 直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸除细胞培养基上清，立即进行第2步裂解步骤。
- 裂解处理
对于离心得到的细胞沉淀：轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，加入适量裂解液RLplus(见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋震荡30sec。沉淀细胞数量 裂解液RLplus ＜5×106 350μL 5×106～1×107 600μL
对于直接裂解的细胞：RLplus (见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），将细胞裂解液转移至离心管中，涡旋震荡30sec。容器直径 裂解液RLplus ＜6cm 350μL 6～10cm 600μL - 将所有溶液转移至DNA吸附柱CB3 (吸附柱CB3放在2mL RNase-Free离心管中)，12000rpm离心30～60sec，收集滤液。将吸附柱CB3放在收集管中室温或4℃放置至后续提取DNA。
总RNA提取：
- 向滤液中加入1倍体积70%乙醇(通常为350μL或600μL)，混匀(此时可能会出现沉淀)，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中(吸附柱CR3放入收集管中)，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
注意：配制70%乙醇时请使用RNase-Free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。将溶液和沉淀转移至吸附柱CR3时，如果体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。 - 向吸附柱CR3中加入700μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
- 向吸附柱CR3中加入500μL漂洗液RW (使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
- 重复步骤6。
- 12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。 - 将吸附柱CR3转入一个新的1.5mL RNase-Free离心管中，加入100μL RNase-Free ddH2O室温放置2min，12000rpm离心2min，得到RNA溶液。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。
基因组DNA提取：
- 向DNA吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入乙醇)，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
- 向吸附柱CB3中加入500μL漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
- 重复步骤11。
- 12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CB3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。 - 将吸附柱CB3转入一个新的1.5mL RNase-Free离心管中，加入100μL洗脱缓冲液TB，室温放置2min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液。
二、从动物组织中同步提取DNA和总RNA
- 匀浆处理：
切割小块组织加入适量裂解液RLplus(见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），用电动或玻璃匀浆器将组织彻底研磨。涡旋震荡30sec。起始组织量 裂解液RLplus 10～20mg 350μL ≥20mg 600μL - 12000rpm离心3～5min，小心吸取上清至DNA吸附柱CB3 (吸附柱CB3放在2mL离心管中)，12000rpm离心30～60sec，收集滤液。将吸附柱CB3放在收集管中室温或4℃放置至后续提取DNA。
总RNA提取：
- 向滤液中加入1倍体积70%乙醇(通常为350μL或600μL），混匀(此时可能会出现沉淀）。
注意：配制70%乙醇时请使用RNase-Free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。 - 得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中(吸附柱CR3放入收集管中），12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱CR3时，如果体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。 - 向吸附柱CR3中加入700μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
- 向吸附柱CR3中加入500μL漂洗液RW (使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
- 重复步骤6。
- 12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。 - 将吸附柱CR3转入一个新的1.5mL RNase-Free离心管中，加入30～100μL RNase-Free ddH2O室温放置2min，12000rpm离心2min，得到RNA溶液。
注意：洗脱体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。
基因组DNA提取：
- 向DNA吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入乙醇)，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
- 向吸附柱CB3中加入500μL漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，12000rpm离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
- 重复步骤11。
- 12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CB3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。 - 将吸附柱CB3转入一个新的1.5mL RNase-Free离心管中，加入30～100μL洗脱缓冲液TB，室温放置2min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液。
- 预防RNase污染，应注意以下几方面：
- 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
- 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
- RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
- 配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，放置过夜，高压灭菌。）
- 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
- DNase I消化流程(可选）：
DNase I储存液的配制：将DNase I干粉(1500U)溶解在550μL RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存(可保存9个月）。
注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃ (可保存6周)，不要再次冻存。- 按照RNA提取流程1～4步进行提取。
- 向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
- DNase I工作液的配制：取10μL DNase I储存液放入新的1.5mL RNase-Free离心管中，加入70μL RDD溶液，轻柔混匀。
- 向吸附柱CR3中央加入80μL的DNase I工作液，室温放置15min。
- 向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
- 按照RNA提取流程6～9步进行提取。
- 按照RNA提取流程1～4步进行提取。
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